組成及試劑配制:
1、致病性大腸桿菌(epec)核酸檢測試劑盒費用說明書酶標板：一塊（96孔）
2、 標準品（凍干品）： 2瓶，請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為200 u/l，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進行倍比稀釋），分別配制成200 u/l，100 u/l，50 u/l，25 u/l，12.5 u/l，6.25 u/l，3.12 u/l，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 u/l。如配制100 u/l標準品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 u/l的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測稀釋液a：1×10ml。
5、 檢測稀釋液b：1×10ml。
產(chǎn)品名稱 英文名稱 價格
致病性大腸桿菌(epec)核酸檢測試劑盒費用說明書 48t 電詢
樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
【標本要求】
人體鼻腔或咽部分泌物:用無菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物，將分泌物或咽拭子置入無菌玻璃管（含0.4ml滅菌生理鹽水），用無菌棉球?qū)⒃嚬苋o后，密閉送檢。標本可立即用于檢測，也可保存于-20℃待測。
【檢驗方法】
1.標本、對照品的核酸裂解處理
用商品化（取得醫(yī)療器械許可證）的rna提取試劑盒處理標本，具體操作參見該試劑盒說明書。
或用trizol法提取，方法如下：取100l樣品置于1.5ml 離心管中，加入300l裂解液（trizol），再加入100， 混勻器上振蕩混勻5sec或顛倒混勻15次； 13000rpm離心15min， 吸取上層液體，加入等體積異丙醇，顛倒混勻室溫靜置10min， 13000rpm離心10min，輕輕倒去上清；加入700l 75%乙醇，顛倒洗滌，13000rpm離心5min，輕輕倒去上清，倒置于吸水紙上，棄盡液體或4000rpm離心5sec，將管壁上的殘余液體甩到管底部，用微量加樣器盡量吸干液體，加入20l depc-h2o溶解rna。
2.試劑配制
取n×19l h7n9核酸熒光pcr檢測混合液與n×1l rt-pcr酶（n為反應(yīng)管數(shù)）,振蕩混勻數(shù)秒, 3000rpm離心數(shù)秒。
3.加樣取上述混合液20l置于pcr管中，然后將樣品核酸提取液、depc-h2o、陽性對照品各5l分別加入pcr管中，蓋好管蓋，立即進行pcr擴增反應(yīng)。
4. pcr擴增反應(yīng)管置于定量熒光pcr儀上，推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：
45℃×10min; 95℃×15min;循環(huán)一次，再按95℃×15sec→60℃×60sec，循環(huán)45次;單點熒光檢測在60℃，反應(yīng)體系為25l。
熒光通道檢測選擇：選用fam通道。
pgam2 elisa kit殺菌/通透性增加蛋白樣2抗體磷酸甘油酸變位酶2(pgam2)elisa試劑盒
lptn/ltn/xcl1 elisa kit嗜乳脂蛋白樣3抗體淋巴細胞趨化因子(lptn/ltn/xcl1)elisa試劑盒
ly6a elisa kit殺菌/通透性增加蛋白樣3抗體淋巴細胞抗原6復(fù)合物基因座a(ly6a)elisa試劑盒
lfa-3/cd58 elisa kitbrd1蛋白抗體淋巴細胞功能相關(guān)抗原3(lfa-3/cd58)elisa試劑盒
lfa-2/cd2 elisa kitbrpf3蛋白抗體淋巴細胞功能相關(guān)抗原2(lfa-2/cd2)elisa試劑盒
ltb elisa kitbxdc1蛋白抗體淋巴毒素β(ltb)elisa試劑盒
lta elisa kit腦蛋白44抗體淋巴毒素α(lta)elisa試劑盒
lek elisa kit腦蛋白44樣蛋白抗體亮腦啡肽(lek)elisa試劑盒
lnpep elisa kit嗜乳脂蛋白樣2抗體亮氨酰-半胱氨酰氨肽酶(lnpep)elisa試劑盒
lap elisa kit嗜乳脂蛋白樣8抗體亮氨酰氨基肽酶(lap)elisa試劑盒
lrrk2 elisa kit嗜乳脂蛋白樣9抗體亮氨酸富含重復(fù)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶2(lrrk2)elisa試劑盒
lap3 elisa kitbtb/poz結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體亮氨酸氨基肽酶3(lap3)elisa試劑盒
sk elisa kit腦特異性血管生成抑制蛋白1抗體鏈激酶(sk)elisa試劑盒
zonulin elisa kitbcl2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體連蛋白(zonulin)elisa試劑盒
gs-ana elisa kit腦環(huán)核苷酸門控通道蛋白1抗體粒細胞特異性抗核抗體(gs-ana)elisa試劑盒
gcp-2/cxcl6 elisa kit癌易感基因復(fù)合蛋白4抗體粒細胞趨化蛋白-2(gcp-2/cxcl6)elisa試劑盒
gm-csf ab elisa kit紡錘體檢查點蛋白抗體粒細胞巨噬細胞集落刺激因子抗體(gm-csf ab)elisa試劑盒
gm-csf elisa kit有絲分裂檢驗點蛋白bubr1抗體粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(gm-csf)elisa試劑盒
g-csf elisa kit癌相關(guān)蛋白3抗體粒細胞集落刺激因子(g-csf)elisa試劑盒
leishimaria ab elisa kit癌相關(guān)蛋白2抗體利什曼原蟲抗體(leishimaria ab)elisa試劑盒
anp elisa kit癌抗雌激素耐藥蛋白1利鈉肽(anp)elisa試劑盒
kp elisa kit胞漿支鏈氨基酸酸轉(zhuǎn)氨酶抗體利鉀尿肽(kp)elisa試劑盒
cirbp elisa kit磷酸化癌抗雌激素耐藥蛋白1抗體冷誘導(dǎo)rna結(jié)合蛋白(cirbp)elisa試劑盒
cg elisa kit促凋亡調(diào)節(jié)蛋白bnip3抗體冷球蛋白(cg)elisa試劑盒
orm2 elisa kit骨形態(tài)發(fā)生蛋白2受體抗體類粘蛋白2(orm2)elisa試劑盒
orm elisa kit甲狀腺激素受體共激活蛋白抗體類粘蛋白(orm)elisa試劑盒
loc382344 elisa kit磷酸化促凋亡bik蛋白抗體類似60s核糖體蛋白l21(loc382344)elisa試劑盒
tnc elisa kit蛋白酪氨酸激酶bap135抗體類肌腱蛋白c(tnc)elisa試劑盒
tn elisa kit磷酸化相關(guān)死亡促進因子抗體類肌腱蛋白(tn)elisa試劑盒
反應(yīng)五要素:
參加pcr反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dntp、模板和mg2+
引物：引物是pcr特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，pcr 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板dna互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用pcr就可將模板dna在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：g+c含量以40-60%為宜，g+c太少擴增效果不佳，g+c過多易出現(xiàn)非特異條帶。atgc隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是最末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致pcr失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以最低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。

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