低分子肝素（low-molecular-weight heparin， lmwh） 是近年發(fā)展起來的新一代肝素類抗血栓藥物， 其抗血栓作用優(yōu)于肝素，而抗凝血作用低于肝素，且具有 皮下注射吸收良好、生物利用度高、體內(nèi)半衰期長、出血 傾向小等優(yōu)點，目前已廣泛應(yīng)用于臨床。根據(jù)lmwh的來 源、生產(chǎn)工藝、末端結(jié)構(gòu)的不同，lmwh 分為許多不同 的種類，如達(dá)替肝素鈉、依諾肝素鈉、那曲肝素鈣、帕米 肝素鈉、汀肝素鈉等。達(dá)替肝素鈉（dalteparin sodium） 是低分子肝素的一種，由亞硝酸降解肝素得到，重均分子 量5600～6400，峰位分子量6000，硫酸化程度為2.0～ 2.5/雙糖單位
本實驗使用高效陰離子交換色譜法測定游離硫酸根含 量，靈敏度高、選擇性好、快速。
測試條件
儀器：戴安ics 1500離子色譜儀； 分析柱：ionpac as11，250×4mm； 保護(hù)柱：ionpac ag11，50×4mm； 柱溫：30℃； 淋洗液：3. 0 mmol/l 碳酸鈉溶液； 流速：1.50 ml/min； 定量環(huán)：25 µl 抑制器：asrs300 4 mm，自循環(huán)模式，電流為23 ma
檢測方式：抑制型電導(dǎo)
樣品前處理
精密稱取達(dá)替肝素鈉20 mg，加水溶解并稀釋至 10 ml，過0.22 µm濾膜。
結(jié)果和討論
樣品濃度的選擇
達(dá)替肝素鈉為多糖，在實驗條件下保留在色譜柱上， 不能被洗脫。樣品濃度為2 mg/ml時，連續(xù)進(jìn)樣10次，硫 酸根保留時間可提前0.3 min。為提高實驗的穩(wěn)定性，延 長色譜柱使用時間，可在滿足定量限的前提下，適當(dāng)降低 達(dá)替肝素鈉的濃度。
色譜柱的選擇及淋洗液梯度條件優(yōu)化
樣品中盡含有氯離子和硫酸根離子，非常易于分離。 本實驗選用ionpac as11色譜柱、3.0 mmol/l碳酸鈉溶液 作為淋洗液，操作簡單。
重現(xiàn)性、線性和靈敏度
取達(dá)替肝素鈉樣品，平行處理六份，在選定的色譜 條件下進(jìn)行分離分析，硫酸根的重現(xiàn)性較好，峰面積、 保留時間、峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd）均低于5%。 選擇一個樣品重復(fù)六次進(jìn)樣，硫酸根的保留時間、峰面 積和峰高的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（rsd）均低于5%，其結(jié)果 見表1。
在選定色譜條件下配制適宜濃度范圍的離子標(biāo)準(zhǔn)曲 線，硫酸根在0.1~40 mg/l范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系， 其線性相關(guān)系數(shù)r=0.9995。在本實驗條件下，基線噪音 約為1.0 ns，根據(jù)三倍基線噪音計算出方法對硫酸根的定 量限為31.7 µg/l，折合樣品中硫酸根含量0.00015%。
實際樣品分析及加標(biāo)回收
取達(dá)替肝素鈉樣品測定并進(jìn)行加標(biāo)實驗，硫酸根的 加標(biāo)回收率依次在99~102%之間。樣品檢測結(jié)果見表2。
結(jié)論
采用本方法可以方便、快捷、準(zhǔn)確檢測達(dá)替肝素鈉 中的硫酸鹽，操作較為簡單，方法重現(xiàn)性較好，結(jié)果可 靠。本實驗所使用的色譜柱as11同時可用于肝素鈉其它 檢測項目如多硫酸軟骨素等項目的檢測

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達(dá)替肝素鈉中硫酸根的測定
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