549-GFP細(xì)胞，GFP標(biāo)記的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 傳代說明
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標(biāo)題：a549-gfp細(xì)胞，gfp標(biāo)記的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 傳代說明
細(xì)胞名稱：a549-gfp gfp標(biāo)記的人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞
貨號：h067
種屬：人
細(xì)胞來源：從atcc/中科院/協(xié)和醫(yī)院等地引進(jìn)
生長特性：貼壁 上皮樣
培養(yǎng)條件：培養(yǎng)基：90%f-12k+10%fbs（推薦使用hakata優(yōu)等胎牛血清hn-fbs-50）
溫度：37℃
氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代說明：
1.用75%酒精噴灑整個培養(yǎng)瓶消毒，將其平躺置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-3小時的緩沖，.然后置于無菌操作臺，打開瓶口，將其中的培養(yǎng)液去掉，再往其中加入5-6ml新鮮培養(yǎng)基(以t25培養(yǎng)瓶為例)并置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，根據(jù)細(xì)胞生長狀況及培養(yǎng)基顏色變化對其進(jìn)行換液以及傳代，一般2到3天換一次液；
2.待細(xì)胞長滿瓶底面積80%-90%，需要對其進(jìn)行傳代，傳代比例為1:3到1:8；
3傳代步驟：將0.25%胰酶-0.53 mm edta消化液置于37°預(yù)熱，倒掉培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，往培養(yǎng)瓶中加入3-5 ml pbs，輕晃洗滌后棄去。往瓶中加1-2 ml預(yù)熱好的胰酶，置于37°孵育消化（第一次消化需時常取出置于顯微鏡下觀察，以顯微鏡下細(xì)胞觸角回收變圓、輕拍瓶壁見細(xì)胞脫落為zui佳消化時間，記錄zui佳消化時間，以便于下次消化），消化好后加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化。用移液槍輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之完全脫落，然后收集細(xì)胞懸液，1200rpm離心3min，棄上清，加入完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代。
保存說明：
凍存條件：80%完全培養(yǎng)基+10%fbs+10%dmso
(備注：建議使用本公司的冷凍液（h-w-100），用4度保存的冷凍液直接重懸細(xì)胞，不能預(yù)熱后使用。)
保存條件：液氮存儲
常見問題說明：
1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師解決。
2.收到細(xì)胞后盡快更換為含 10%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加 10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過 72 小時）
3.細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。1-2小時后觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留8-10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長至匯合度80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會一直跟蹤指導(dǎo)，直到問題解決。
供應(yīng)商：慧穎細(xì)胞庫 人源均來自于第三方str鑒定，請放心購買
供應(yīng)限制：僅供科研使用
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