chromotek介紹
德國chromotek公司成立于2008年，致力于細胞生物學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)的研發(fā)與研究，公司擁有強大的研發(fā)團隊，有先進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質(zhì)量的實驗數(shù)據(jù)。
德國chromotek公司 聯(lián)合中國專業(yè)的生物技術(shù)服務(wù)提供商－biotnt,針對中國市場的實際情況，推出全世界可靠的gfp 相關(guān)產(chǎn)品。
chromotek的產(chǎn)品分類：
一、nano-trap系列；以產(chǎn)品結(jié)合物為標(biāo)準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結(jié)合物包括gfp trap，rfp trap，gst trap，dnmt1-trap；mk2-trap；p53-trap；mdm4/ hdmx-trap
二、 booster系列；含gfp booster rfp booster；
三、 可用于hca 實驗的chromobodies(質(zhì)粒或細胞系形式)；
四、  高品質(zhì)抗體（標(biāo)簽蛋白抗體和普通抗體）；
產(chǎn)品一：
gfp-trap?  —— 值得信賴的科研工具：
nano-trap：與agarose beads或者magnetic beads結(jié)合，在免疫沉淀或蛋白質(zhì)相互作用的實驗中，可高效抓取或純化gfp或rpf融合蛋白。 （優(yōu)點：三好三多）
優(yōu)點一：抗體好---------nano-traps采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（vhhs）；具有分子量?。?5kda）、極端穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結(jié)合gfp蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點；gfp抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物，如egfp, wtgfp, gfp s65t，taggfp，不與rfp衍生蛋白結(jié)合。
優(yōu)點二：形式好-------抗體結(jié)合了agarose beads（瓊脂糖珠子）或者magnetic beads（磁珠），在ip實驗，coip ，pulldown，chip實驗中可以直接取代特異性gfp 抗體+proteina/g 瓊脂糖珠子；
優(yōu)點三：效果好------孵化時間短（只需5-30min），能夠更好與結(jié)合，從細胞提取物或細胞器中定量分離gfp融合蛋白及結(jié)合因子
優(yōu)點四：實驗應(yīng)用多：被廣泛用于免疫沉淀、質(zhì)譜分析、酶活測定、生物大分子相互作用/親和力實驗、染色質(zhì)免疫沉淀（chip）、蛋白質(zhì)相互作用分析；
優(yōu)點五：產(chǎn)品多：有g(shù)fp trap，rfp trap，gst trap，dnmt1-trap；mk2-trap；p53-trap；mdm4/ hdmx-trap new!更多trap 新品，給您提供更多的科研工具！gfp，rfp，gst trap作為標(biāo)簽蛋白的特異性純化方法，dnmt1-trap；mk2-trap；p53-trap；mdm4/ hdmx-trap 是用于純化目的蛋白。
優(yōu)點六：樣品類型多：mammalian cells（哺乳細胞）；tissues/ organisms（組織/器官樣本）；bacteria（細菌）；yeast （酵母）；plants （植物樣本）
僅需六個步驟，30min 僅需6個步驟，30min 實驗，chromotek gfp-trap?_a的5大實驗應(yīng)用：
→→ →收集細胞     細胞裂解      平衡beads      結(jié)合蛋白 ,加入裂解的細胞   →    清洗beads   →  洗脫蛋白
免疫沉淀
酶活測定
co-ip
pull down
chip
后期實驗
western blot
酶活測定
沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用sds-page 跑膠，western blot鑒定預(yù)測作用蛋白y，或樣品利用質(zhì)譜后續(xù)分析。
洗脫的復(fù)合物；同時進行g(shù)fp和第二標(biāo)簽的western blot 實驗。
交聯(lián)反應(yīng)逆轉(zhuǎn)，dna純化，dna鑒定（如用qpcr 或者chip實驗），同普通chip   實驗
nano trap替代的產(chǎn)品
gfp單克隆/多克隆抗體+protein a/g瓊脂糖微珠
gfp單克隆/多克隆抗體+protein a/g瓊脂糖微珠
gfp單克隆或多克隆抗體+protein a/g瓊脂糖微珠
gst   標(biāo)簽蛋白的親和層析柱或瓊脂糖微珠
gfp單克隆或多克隆抗體+protein a/g瓊脂糖微珠
目的
弱gfp蛋白樣品的富集；或后期實驗
可以用beads直接測定酶活
蛋白-蛋白相互作用，一般驗證體內(nèi)的蛋白互作
蛋白-蛋白相互作用，一般驗證體外的蛋白互作
蛋白-dna相互作用
（1）實驗不同，裂解的細胞不同；pulldown 加入的是gfp融合蛋白和第二標(biāo)簽融合蛋白的裂解物；chip實驗為細胞固定步驟，染色質(zhì)斷裂步驟；
實驗不同，加入的裂解物不同；chip實驗加入的為斷裂的dna-蛋白復(fù)合物；
（2） gfp-trap 用于ip 實驗（immunoprecipitation）（免疫沉淀）和co-ip 實驗（免疫共沉淀） ：
co-ip 實驗（co-immunoprecipitation）（免疫共沉淀）原理圖
傳統(tǒng)ip
gfp-trap用于ip
傳統(tǒng)co-ip
gfp-trap用于co-ip
a
b
c
d
實驗原理
抗體與細胞裂解液或上清中相應(yīng)蛋白結(jié)合后，再與蛋白a/g（proteina/g）或二抗偶聯(lián)的agarose珠子孵育，得到蛋白復(fù)合物，洗脫蛋白。
細胞裂解液或上清中的gfp融合蛋白與gfp-trap孵育，得到蛋白復(fù)合物，洗脫蛋白。
細胞非變性條件下裂解，完整胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)－蛋白質(zhì)間的相互作用被保留。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x，與x在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來。結(jié)合的實驗原理同a/b
目的
得到純化的蛋白或進行后期實驗
同a
研究蛋白質(zhì)相互作用
后期實驗
洗脫的蛋白采用sds-page 跑膠，采用gfp 抗體western blot進行鑒定。
沉淀的蛋白質(zhì)復(fù)合物采用sds-page 跑膠，western blot 鑒定，也可利用質(zhì)譜進行后續(xù)分析。
時間
長，超過一天
短，30min
同a
同b
步驟
多，超過20個步驟
少，僅需6個步驟
同a
同b
特異性
普通抗體特異性不高
羊駝抗體，特異性高
同a
同b
使用產(chǎn)品
可選用特異性抗體 或gfp單克隆或多克隆抗體+protein a/g瓊脂糖微珠
gfp抗體-瓊脂糖珠子，rfp-trap，gst-trap，dnmt1-trap
同a
同b
適用性
通用方法，適合面寬
有g(shù)fp，rfp，gst，dnmt1-trap等4個品種的標(biāo)簽蛋白trap 可選
同a
同b
產(chǎn)物
純度不高
純度高，對比見下左圖
 
 
nano-traps主要產(chǎn)品見表：
 
品牌
貨號
品名
規(guī)格
價格
gfp-trap?
chromo tek
gta-10
gfp-trap?, coupled to agarose
10 rxns
2000
chromo tek
gta-20
gfp-trap?, coupled to agarose
20 rxns
6700
chromo tek
gta-100
gfp-trap?, coupled to agarose
100 rxns
27090
chromo tek
gta-200
gfp-trap? coupled to agarose
200 rxns
48240
chromo tek
gta-400
gfp-trap? coupled to agarose
400 rxns
84330
chromo tek
gtak-20
gfp-trap? coupled to agarose kit
20 rxns
8400
chromo tek
gtm-20
gfp-trap? coupled to magnetic beads
20 rxns
6700
chromo tek
gtm-100
gfp-trap? coupled to magnetic beads
100 rxns
27090
chromo tek
gtm-200
gfp-trap? coupled to magnetic beads
200 rxns
5360
chromo tek
gtp-96
gfp-multitrap?, black 96 well plate
1 pc
4100
chromo tek
gtp-96
gfp-multitrap?, black 96 well plate
5 pc
15600
chromo tek
gtm-400
gfp-trap? coupled to magnetic beads
400 rxns
84330
chromo tek
gtmk-20
gfp-trap? coupled to magnetic beads kit
20 rxns
8400
chromo tek
gt-250
gfp-trap? free protein
250 μg
4500
rfp-trap?
chromo tek
rta 10
rfp-trap?, coupled to agarose
10rxns
2000
chromo tek
rta 20
rfp-trap?, coupled to agarose
20rxns
6700
chromo tek
rta 100
rfp-trap?, coupled to agarose
100 rxns
27090
chromo tek
rta200
rfp-trap?, coupled to agarose
200rxns
5360
chromo tek
rta 400
rfp-trap?, coupled to agarose
400rxns
84330
chromo tek
rtak-20
rfp-trap?, coupled to agarose,
20 rxns
8400
chromo tek
rt-250
rfp-trap?, free protein
250 μg
4500
gst-trap
chromo tek
stm-10
gst-trap?, coupled to magnetic beads
10 rxns
2000
chromo tek
stm-20
gst-trap?, coupled to magnetic beads
20 rxns
6700
chromo tek
stm-100
gst-trap?, coupled to magnetic beads
100 rxns
27090
chromo tek
stm-200
gst-trap?, coupled to magnetic beads
200 rxns
48240
chromo tek
stm-400
gst-trap?, coupled to magnetic beads
400 rxns
84330
chromo tek
stmk-20
gst-trap?, coupled to magnetic beads, kit
20 rxns
8400
chromo tek
st-250
gst-trap?, free protein
250 μg
4500
dnmt1-trap
chromo tek
dta-10
dnmt1-trap, coupled to agarose
10 rxns
2000
chromo tek
dta-20
dnmt1-trap, coupled to agarose
20 rxns
6700
chromo tek
dta-100
dnmt1-trap, coupled to agarose
100 rxns
27090
chromo tek
dta-200
dnmt1-trap, coupled to agarose
200 rxns
48240
chromo tek
dta-400
dnmt1-trap, coupled to agarose
400 rxns
84330
chromo tek
dtak-20
dnmt1-trap, coupled to agarose, kit
20rxns
8400
chromo tek
dt-250
dnmt1-trap,freeprotein
250μg
4500
binding controls
chromo tek
bab-20
blocked agarose beads (binding control)
500 μl (20 rxns)
1500
chromo tek
bmp-20
blocked magnetic particles ( binding control)
500 μ l ( 20 rxns)
1500
產(chǎn)品二：
nano-booster是利用atto公司的優(yōu)質(zhì)熒光素共價結(jié)合到特異性gfp抗體上；當(dāng)gfp 融合蛋白信號比較弱的時候，或者熒光蛋白變性后，具有再激活的作用。
在研究活細胞中蛋白定位和動力學(xué)的過程中是不是會有如下的困惑：
1.固定樣品中細胞表達的熒光融合蛋白信號強度在生理表達水平通常很低？
2.熒光蛋白的耐光性和量子效率達不到超分辨顯微鏡的要求（如：3d-sim, sted或 storm/ palm）？
3.許多細胞生物學(xué)方法如hcl處理的brdu檢測，edu-click-it處理或者熱變性的熒光原位雜交（fish）會干擾熒光融合蛋白信號的檢測，需要重新激活gfp 信號？
優(yōu)點：
優(yōu)點一：抗體好---------nano-boostern 采用的抗體是基于alpaca的單域抗體片段（vhhs）；具有分子量?。?5kda）、極端穩(wěn)定（70℃仍保持穩(wěn)定），高親和力（高特異性性結(jié)合gfp蛋白），無普通抗體輕鏈與重鏈污染等一系列優(yōu)點等優(yōu)點；gfp抗體可以特異性結(jié)合綠色熒光蛋白的衍生物，如egfp, wtgfp, gfp s65t，taggfp，不與rfp衍生蛋白結(jié)合。
優(yōu)點二：atto公司的優(yōu)質(zhì)熒光素，具有增強熒光的作用；
優(yōu)點三：作用效果好：
1、作為熒光增強劑使用；
2、對變性熒光蛋白具有再激活作用；
3、不僅能夠增強信號，還能夠增加熒光蛋白熒光穩(wěn)定性。
優(yōu)點四：產(chǎn)品多：不僅有g(shù)fp booster，還有rfp booster；
nano booster 產(chǎn)品應(yīng)用：
1、產(chǎn)品實驗方法：免疫熒光（if）,免疫組化（ihc）；
2、產(chǎn)品使用材料：細胞系，組織切片；
3、產(chǎn)品應(yīng)用方向：熒光顯微鏡，激光共聚焦顯微鏡，超分辨率顯微鏡（3d-sim，palm, sted,storm）；
實驗結(jié)果改進示例：
實驗應(yīng)用：
上圖：比較 hela 細胞系核表達的gfp-融合蛋白，gfp 信號增強（g fp-booster_atto488使用前和使用后）由用戶確定最適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。
edu-click-it? 處理會導(dǎo)致gfp 信號的毀壞。 gfp-booster標(biāo)記了gfp 融合蛋白，因此有激活和加強熒光信號的作用(稀釋比例 1/200, 1 h at rt) (gfp-booster with edu-click-it? protocol)。下圖：gfp-dnmt1 融合蛋白，三色熒光檢測，同時檢測  紅色：5’ edu-click-it? alexa fluor 594信號；綠色，結(jié)合了gfp booster 信號；藍色，dapi 信號（在edu-click-it? 處理后gfp booster）
nano-booster主要產(chǎn)品見下表：
 
貨號
品名
規(guī)格
價格
gfp-booster
chromo tek
gba488-ts
gfp-booster_atto488-ts
50 μg
2500
chromo tek
gba488
gfp-booster_atto488
100 μg
5400
chromo tek
gba-647n
gfp-booster-atto 647n
100 μg
詢價
chromo tek
gbdl-650-ts
gfp-booster- atto 647n
50 μg
詢價
chromo tek
gba-594
gfp-booster-atto 594
100 μg
詢價
rfp-booster
chromo tek
rba594-ts
rfp booster atto594 ts
50u g
2500
chromo tek
rba594
rfp-booster_atto594
100 μg
5400
chromo tek
rbdl-650-ts
rfp-booster- atto 650ts
50 μg
詢價
chromo tek
rba-700
rfp-booster-atto 700
100 μg
詢價
chromo tek
rba-488
rfp-booster-atto 488
100 μg
詢價
備注：invtrogen新推出的click-it? edu檢測也是以檢測新合成dna中摻入的核苷類似物為基礎(chǔ)，但該方法所采用的核苷類似物是edu，而且不是通過抗體檢測，而是基于一個click反應(yīng) --銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價反應(yīng)。click-it檢測避免了brdu檢測所需的苛刻處理條件，可避免dna變性，維持樣本的形態(tài)，因而提供了一種更可靠且更簡單的方法進行細胞增殖檢測。
dapi，是一種能夠與dna強力結(jié)合的熒光染料，常用與熒光顯微鏡觀測。因為dapi可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，dapi染劑是利用紫外光波長的光線激發(fā)。當(dāng)dapi與雙股dna結(jié)合時，最大吸收波長為358nm，最大發(fā)射波長為461nm，其發(fā)散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。 所以不會影響綠色熒光蛋白的觀測。
產(chǎn)品三：chromobodies
chromotek公司的chromobodies?是一種新的極其微小的細胞內(nèi)功能抗體。它是基于融合有熒光蛋白(e.g.tag gfp or tag rfpfrom evrogen)的來自羊駱抗體重鏈的抗原結(jié)合域結(jié)構(gòu)(vhh)。和普通抗體不同的是，這些創(chuàng)新的熒光納米探針可以使活細胞的結(jié)構(gòu)和進程實時分析和可視化。因此，chromobodies? 是做研究細胞內(nèi)研究包含高含量分析（hca）的一種新的理想試劑。
除了穩(wěn)定細胞株，你也可以得到chromobody?質(zhì)粒，它允許你創(chuàng)建自己的細胞系或瞬時表達chromobody?。
所有chromobody?結(jié)合域都是經(jīng)過精心挑選，以不干擾內(nèi)源性蛋白質(zhì)的功能，并提供了獨特的機會來標(biāo)記活細胞中天然蛋白。
產(chǎn)品形式：質(zhì)?；蛘呒毎诞a(chǎn)品。
chromobodies系列產(chǎn)品見下表：
actin chromobody
貨號
chromo tek
品名
規(guī)格
價格
dcg
chromo tek
dnmt1-chromobody?plasmid,αdnmt1-gfp
20μg
14900
dcr
chromo tek
dnmt1-chromobody?plasmid,αdnmt1-rfp
20μg
14900
ccg
chromo tek
cell cycle chromobody? plasmid αpcna gfp
20 μg
14900
ccr
chromo tek
cell cycle chromobody? plasmid pcna rfp
20 μg
14900
lcg
chromo tek
lamin chromobody? plasmid, αlamin-gfp
20 μg
14900
lcr
chromo tek
lamin chromobody? plasmid, αlamin-rfp
20 μg
14900
acg
chromo tek
actin chromobody? plasmid, αactin-gfp
20 μg
14900
acr
chromo tek
actin chromobody? plasmid, αactin-rfp
20 μg
14900
產(chǎn)品系列四：
chromotek推出一系列高質(zhì)量常見抗體見下表：
熒光標(biāo)簽抗體
貨號
品牌
品名
規(guī)格
價格
3f5
chromo tek
rfp antibody mouse monoclonal
100 μg
3900
5f8
chromo tek
rfp antibody rat monoclonal
100 μg
3900
3h9
chromo tek
gfp antibody, rat monoclonal
100 μg
3900
標(biāo)簽抗體
貨號
品牌
品名
規(guī)格
價格
6g9
chromo tek
gst antibody, rat monoclonal
100 μ l
3900
6f7
chromo tek
flag antibody, rat monoclonal
100 μg
3900
9e1
chromo tek
c-myc antibody, rat monoclonal
100 μg
3900
7c9
chromo tek
ha antibody, rat monoclonal
100 μg
3900
目的蛋白抗體
貨號
品牌
品名
規(guī)格
價格
2e8
chromo tek
dnmt1antibody,ratmonoclonal
500μl
4900
2e8ts
chromo tek
dnmt1antibody,ratmonoclonal
125μl
2000
16d10
chromo tek
pcna antibody rat monoclonal
100 μg
4900
16d10ts
chromo tek
pcna antibody rat monoclonal
25 μg
2000
4b8
chromo tek
ago1 antibody, rat monoclonal
100 μg
5400
4b8ts
chromo tek
ago1 antibody, rat monoclonal
25 μg
2000
11a9
chromo tek
ago2 antibody, rat monoclonal
100 μg
5400
11a9ts
chromo tek
ago2 antibody, rat monoclonal
25 μg
2000
1c7
chromo tek
rna pol ii ctd, unphosphorylated ctd
5 ml
5400
1c7ts
chromo tek
rna pol ii ctd, unphosphorylated ctd
1 ml
2000
3d12
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. tyrosine 1
5 ml
5400
3d12ts
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. tyrosine 1
1 ml
2000
3e10
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 2
5 ml
5400
3e10ts
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 2
1 ml
2000
6d7
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. threonine 4
5 ml
5400
6d7ts
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. threonine 4
1 ml
2000
3e8
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 5
5 ml
5400
3e8ts
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 5
1 ml
2000
4e12
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 7
5 ml
5400
4e12ts
chromo tek
rna pol ii ctd, phos. serine 7
1 ml
2000

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