凱氏定氮儀的工作原理
蛋白質(zhì)是含氮的有機(jī)化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結(jié)合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。
1.有機(jī)物中的胺根在強(qiáng)熱和cuso4，濃h2so4 作用下，硝化生成（nh4）2so4
反應(yīng)式為：
2nh2+h2s04+2h＝(nh4)2s04 （其中cuso4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出nh3 ，收集于h3bo3 溶液中
反應(yīng)式為:
(nh4)2so4+2naoh＝2nh3+2h2o+na2so4
2nh3+4h3bo3＝(nh4)2b4o7+5h2o
3. 用已知濃度的h2so4（或hci）標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定，根據(jù)hci消耗的量計(jì)算出氮的含量，然后乘以相應(yīng)的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量
反應(yīng)式為：
(nh4)2b4o7+h2so4+5h2o＝(nh4)2so4+4h3bo3
(nh4)2b4o7+2hcl+5h2o＝2nh4cl+4h3bo3
凱氏定氮儀操作步驟：
（一）消化
1、準(zhǔn)備6個(gè)凱氏燒瓶，標(biāo)號。1、2、3號燒瓶中分別加入適當(dāng)濃度的蛋白溶液1.0ml，樣品要加到燒瓶底部，切勿沾在瓶口及瓶頸上。再依次加入硫酸鉀-硫酸銅接觸劑0.3g，濃硫酸2.0ml，30%過氧化氫1.0ml。4、5、6號燒瓶作為空白對照，用以測定試劑中可能含有的微量含氮物質(zhì)，對樣品測定進(jìn)行校正。4、5、6號燒瓶中加入蒸餾水1.0ml代替樣液，其余所加試劑與1、2、3號燒瓶相同。
2、將加好試劑的各燒瓶放置消化架上，接好抽氣裝置。先用微火加熱煮沸，此時(shí)燒瓶內(nèi)物質(zhì)炭化變黑，并產(chǎn)生大量泡沫，務(wù)必注意防止氣泡沖出管口。待泡沫消失停止產(chǎn)生后，加大火力，保持瓶內(nèi)液體微沸，至溶液澄清后，再繼續(xù)加熱使消化液微沸15min。在消化過程中要隨時(shí)轉(zhuǎn)動燒瓶，以使內(nèi)壁粘著物質(zhì)均能流入底部，以保證樣品完全消化。消化時(shí)放出的氣體內(nèi)含so2，具有強(qiáng)烈刺激性，因此自始自終應(yīng)打開抽水泵將氣體抽入自來水排出。整個(gè)消化過程均應(yīng)在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。消化完全后，關(guān)閉火焰，使燒瓶冷卻至室溫。
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