m199是經(jīng)典的細(xì)胞培養(yǎng)基,也常作為疫苗生產(chǎn)用的培養(yǎng)液,用于地鼠腎細(xì)胞、原代雞胚細(xì)胞、vero細(xì)胞的大規(guī)模培養(yǎng)。這其中,也添加有新生牛血清,水解乳蛋白等。
近年有文獻(xiàn)報道,改良的m199比經(jīng)典的m199的效果更好1。但具體的改良配方并未透露,只提到調(diào)整了氨基酸等營養(yǎng)成分的配比。因此,如果在不升高成本的情況下,改用改進(jìn)后的m199培養(yǎng)基,會帶來更好的細(xì)胞培養(yǎng)效果和經(jīng)濟(jì)效益。
在現(xiàn)有培養(yǎng)基中,sfre199是值得關(guān)注的,它恰好是m199的改良型。它的改進(jìn)方面主要為:1、升高了葡萄糖和8種氨基酸(精氨酸-鹽酸、半胱氨酸、胱氨酸、l -谷氨酰胺、l -谷氨酸、甘氨酸、組氨酸、酪氨酸)的濃度,使其達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞的最大活力,而又不產(chǎn)生毒性;2、加入了硫酸鋅、丙酮酸鈉和魚精蛋白鋅胰島素。3、降低了硝酸鐵、黃嘌呤和碳酸氫鈉的濃度。4、加入了半乳糖。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),半乳糖可使細(xì)胞培養(yǎng)液中的乳酸降低54%3,使ph保持穩(wěn)定。
sfre199最初是用于原代狒狒腎細(xì)胞的培養(yǎng)3,后來也有用于牛輸卵管峽部上皮細(xì)胞和壺腹上皮細(xì)胞的培養(yǎng)。其特點(diǎn)是,都只用了sfre199,而沒有添加血清,細(xì)胞的培養(yǎng)效果仍然理想。值得注意的是,原代細(xì)胞較細(xì)胞系難培養(yǎng),因此,sfre199中升高的氨基酸和葡萄糖濃度,顯然更有利于原代細(xì)胞的生長。同時,上述細(xì)胞都屬于泌尿生殖系細(xì)胞。vero細(xì)胞、地鼠腎細(xì)胞與上述細(xì)胞的起源相同,可以想見,sfre199也同樣非常有可能適用于這些疫苗生產(chǎn)細(xì)胞的培養(yǎng)。事實(shí)上,國外在1992年時即有報道3,用sfre199作為化學(xué)限定培養(yǎng)基的一部分,用于vero細(xì)胞的靜置培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng),只不過還添加了bsa和血清替代物等,并且發(fā)現(xiàn),sfre199培養(yǎng)的效果很好。而在實(shí)際應(yīng)用中,用sfre199替代m199,同時降低牛血清的用量,也是非常有可能的,從而降低生產(chǎn)成本。
在sfre199對m199的改進(jìn)中,值得注意的是添加了硫酸鋅和胰島素。有研究者發(fā)現(xiàn),如果在sfre199中去除這2個成分,則細(xì)胞二倍分裂時間延長,細(xì)胞不能很快長滿,若含有這2種成分,則該培養(yǎng)基支持生長的能力相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)對照血清培養(yǎng)基3。
因此,如果疫苗生產(chǎn)企業(yè)目前用的培養(yǎng)液是m199,則推薦更換為sfre199,因?yàn)樯a(chǎn)成本沒有增加,而細(xì)胞生長和病毒滴度卻可有一個理想的結(jié)果。
參考文獻(xiàn)
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