兔子白介素3（IL-3）ELISA試劑盒操作步驟及注意事項(xiàng)
兔子白介素3(il-3)elisa試劑盒操作步驟及注意事項(xiàng)
操作步驟：
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
2、酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12、分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，zui終測得的od值為兩者之差(w1-w2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(s)和陰性對照(n)的 od值后，計(jì)算s/n值。s/n≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
注意事項(xiàng)：
1、在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。
2、建議新鮮標(biāo)本收集后盡早檢測。1-3天左右檢測的樣本可儲(chǔ)存在4℃?zhèn)溆谩Ｈ缬刑厥庠蛐枰芷谛允占瘶?biāo)本，請將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或- 70℃條件下保存，避免反復(fù)凍融。
3、當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
4、洗滌過程非常重要，不充分的洗滌易造成假陽性。
5、一次加樣時(shí)間zui好控制在5分鐘內(nèi)。
6、請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，zui好做復(fù)孔。
7、如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先稀釋后再測定，計(jì)算時(shí)請zui后乘以稀釋倍數(shù)。
8、在配制標(biāo)準(zhǔn)品、檢測溶液工作液時(shí)，請以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。
9、底物請避光保存。
10、不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。
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1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。
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3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入pbs 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人aif抗體工作液50μl。
5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
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7、每孔加1:5000稀釋的hrp-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
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10、每孔加tmb顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/l h2so4終止反應(yīng)。
12、分別測450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，zui終測得的od值為兩者之差(w1-w2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
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